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Chinese Name

中文名


D-荧光素钾

English Name

英文名


D-Luciferin Potassium salt

Alias

别名


(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylic acid potassium salt;Firefly Luciferin potassium salt


CAS NO.


15144-35-9

Formula

分子式


C11H7KN203S2

M.W.

分子量


318.41

Class

分类


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活体成像技术(opticalinvivoimaging)如今主要回收生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于荧光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化学发光的原理,将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内,与前期注射入体内的底物发生发火反响反应运用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的改变或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的直立,并可用于病毒学钻研、siRNA钻研、干细胞钻研、蛋白质相互作用钻研等。

原理:常见的荧光素酶有两种,分别是萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,编码基因是luc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,编码基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它们合营的作用原理是正在ATP和荧光素酶的催化作用下,底物被氧化发光(差异底物光的颜色和波长差异),当底物过量时,发作的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。

应用:

1)体外化学发光分析(in vitro);

2)活体成像执行(in vivo);

3)下灵敏度ATP理会;

4)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-领悟基因体内/体外表达的成像理会;

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步骤:

Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays /体外生物发光检测

1)用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素,配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后马上应用或分装后-20℃冻存。

2)用组织培养基1∶200稀释储存液,设置工作液(终浓度150μg/mL)。

3)去除作育细胞的培养基。

4)待图像理会前,背细胞内增添1×荧光素工作液,然后住手图像理会。

Protocol 2:In vivo analysis /活体成像理会

1)用无菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-荧光素工作液(15mg/mL),0.2 um滤膜过滤除菌。一旦应用,贯穿连接酷寒且避光。

2)注射量取决于注射体式格式,具体以下:

注射体式格式剂量静脉注射(25-27 gauge针头)按10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge针头)按10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液肌肉注射(27 gauge针头)50 uL,浓度为1–2 mg/mL荧光素工作液鼻内注射(pipette)50 uL,浓度为3 mg/mL荧光素工作液3)注射入体内5-10分钟后,住手成像理会。

溶解:0.25%浓度溶解于甲醇,组成近乎无色至浅黄色的清夜

生计:-15°C 避光



1. Barth et al. Molecular Therapy. 2008, 16. 957-964.
2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
3. Marques et al. Journal of Neurovirology. 2008, 14 (3). 229-238.
4. Stish et al. J. Neurooncol. 2008, 61 (1). 51-61.
5. Zhang et al. Cancer Research. 2007, 67. 9389-9397. 6. Baia, G. et al, Brain Pathology, 2007, 18 (2), 172-179.
7. Barth, A. et al, Molecular Therapy, 2008, 16 (5), 957-964.
8. Su Y. et al. Clinical and Experimental Metastasis, 2009



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